PCS-i220A/B柱后衍生仪在15药典测定中应用

　　测量方法：
 

　　本法系用液相色谱法(通则0512)测定药材、饮片及制剂中的毒素(以毒素B1、毒素B2、毒素G1，毒素G2总量计)，除另有规定外，按下列方法测定。
 

　　液相色谱仪器构成：
 

　　等度液相色谱仪(高压输液泵一台、荧光检测器一台、柱温箱一台、进样器1件、色谱柱一根等)
 

　　柱后衍生仪：PCS-i220A/B

 

　　色谱柱：PC C18 4.6×150mm，5μm
 

　　高速离心机：离心速度4000转/分钟以上
 

　　溶剂过滤器
 

　　超声波清洗器
 

　　固相萃取仪
 

　　免疫亲和柱
 

　　分析天平：万分之一
 

　　均质器(高速搅拌器)：搅拌速度大于11000转/分钟
 

　　试剂
 

　　甲醇：色谱纯
 

　　乙腈：色谱纯
 

　　0.05%的碘溶液
 

　　超纯水
 

　　毒素B1.毒素B2、毒素G1、毒素G2对照品
 

　　色谱条件
 

　　检测器：荧光检测器
 

　　色谱柱：PC C18 4.6×150mm，5μm
 

　　流动相：甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)
 

　　流速：1.0ml/min
 

　　柱温：40℃
 

　　衍生溶液：0.05%的碘溶液(取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成)
 

　　衍生化泵流速：0.2ml/min
 

　　衍生化温度:70℃
 

　　激发波长λex=360nm(或365nm)，发射波长λem=450nm
 

　　混合对照品溶液的制备
 

　　精密量取毒素混合标准品(毒素B1、毒素B2、毒素G1、毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/m1)0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。
 

　　供试品溶液的制备
 

　　取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转/分钟)，离心5分钟(离心速度4000转/分钟)，精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
 

　　测定方法
 

　　精密吸取上述混合对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。另精密吸取上述供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算出终结果。
 

　　毒素B1、B2、G1、G2对照品色谱图：

 

　　以上是使用PCS-i220A/B柱后衍生仪 结果基线平稳 峰型窄 检出限低 检测准确 *方法要求。